Topraktan izole edilen Bacillus subtilis A8'den proteaz üretimi ve karakterizasyonu

Bu çalışmada, Ergani Makam Dağı'ndan alınan toprak örneğinden bakteri izole edildi. İzole edilen bakteri biyokimyasal ve 16S rRNA analizleri yardımıyla Bacillus subtilis A8 olarak tanımlandı. Bakteri üremesinin optimum koşulları 24. saat, 37°C ve pH 9.0 olarak belirlendi. Proteaz aktivitesine bakıldığında optimum üretim zamanı 24 saat, optimum sıcaklık 37°C, optimum pH ise 9.0 olarak tespit edildi. Bakterinin üretim ortamına karbon ve azot kaynakları ilave edilerek proteaz üretimi üzerine etkisi araştırıldı. Karbon kaynaklarında; nişasta, glukoz, maltoz, laktozun proteaz üretiminde kontrole göre yaklaşık üç kat artış, galaktoz ilavesiyle de enzim üretiminde azalış gözlendi. Azot kaynakları içinde en yüksek değere üre ile ulaşılırken amonyum sülfat etkisi ile de enzim üretiminde önemli ölçüde inhibisyon tespit edildi. Enzimin optimum koşulları belirlendikten sonra kısmi saflaştırma gerçekleştirildi. Kısmi olarak saflaştırılan enzim üzerine %0.5'lik SDS, BRIJ, Tween- 40, Tween-80 ve TritonX-100 kullanılarak deterjan etkisi araştırıldı. SDS'nin proteaz aktivitesini %80 oranında inhibe ettiği görülürken diğer deterjanların enzim aktivitesi üzerine önemli bir etki yapmadığı tespit edildi. Kısmi saflaştırılması yapılan proteaz üzerine inhibitör etkisi incelendiğinde; EDTA (Etilendiamin tetraasetik asit), PMSF (Fenilmetilsulfonil florid), DTT (Ditiyothreitol ve β-merkaptoetanol gibi inhibitörler arasında en yüksek inhibisyon etkisi 10 mM PMSF (%92) ile elde edildi.