Yoğun bakım hastalarından izole edilen Pseudomonas aeruginosa izolatlarının virulans faktörlerinin ve quarum sensing genlerinin belirlenmesi ve baicalin maddesinin biyofilm üzerine etkisinin araştırılması

Amaç: Yoğun bakım hastalarının farklı örneklerinden izole edilen P. aeruginosa (n:136) izolatının biyofilm oluşumunun belirlenip filogenetik yakınlıklarının değerlendirilerek, virülans faktörlerinin üretiminde düzenleyici rolü olan toxA, algD, plcN, plcH, lasB, lasI, lasR, rhII, rhIR varlığının araştırılmasıdır. Ayrıca güçlü biyofilm üreten bakterilerin (3+) seftazidim, kolistin kombinasyonun sinerjik etkinliğinin ve baicalinin biyofilm oluşumunu engelleyici etkisinin belirlenmesidir. Materyal ve Metot: Biyofilm oluşumunun belirlenmesinde fenotipik yöntemlerden olan mikroplakta absorbans ölçümüne dayalı olarak biyofilm derecelendirilmesi yapıldı. Filogenetik ilişkinin ERIC-2 primerleri kullanılarak RAPD-PZR yöntemiyle araştırıldı. Gen bölglerinin varlığı polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) yöntemi ile saptandı. Biyofilm testi sonucunda 3 + olan suşlara kolistin ve seftazidim kombinasyonun invitro sinerjik etkinliği checkerboard yöntemi ile değerlendirildi. Ayrıca baicalinin biyofilm önleyici etkisi sub-MİK ile belirlendi. Bulgular: Biyofilm mikroplak yöntemine göre derecelendirme (0,1,2,3) oranları sırası ile %37,5, %44,85, %12,5, %5,15 olduğu belirlenmiştir. Mikroplak yöntemine göre güçlü (3+) biyofilm üretme derecesine sahip olan suşların baicalin sub-MİK değerinin 512 µg/ml olduğu belirlenmiştir. Seftazidim, kolistin kombinasyonunda sinerji oluşumu gözlemlenmemiştir. Gen pozitifliklerinin sırasıyla (toxA, plcH, algD, lasB, plcN; intakt ve internal quarum sensing (lasI, lasR, rhlI ve rhlR)) %87,50, %99,26, %100, %100, %100, %93,38, %83,08, %98,52, %93,38; %95,58, %97,05, %100, %98,52. Filogenetik yakınlıklarının belirlenmesi için RAPD-PZR yapılarak dendograma çizilmiş; 10-113, 109-39, 50-53, 35-78, 40-74, 45-95-97, 103-49, 133-66, 23-34, 14-28, 1-19, 22-6, 83-86, 105-32, 125-30, 108-82, 117-88 suşlarının kökenlerinin aynı olabileceği belirlenmiştir. Sonuç: Yoğun bakımdan izole edilen P. aeruginosa suşlarının biyofilm üretim, belirlenen virülans gen pozitiflik ve çoklu antibiyotik direnç oranının yüksek olduğu, fakat filogenetik yakınlıklarının %80 eşik değerinde benzerliklerin olduğu belirlenmiştir. Yüksek biyofilm üreten suşlarda seftazidim, kolistin antibiyotiklerinin sinerjik etki gözlemlenmemiş olup, biyofilme baicalinin belli konsantrasyonunun etkili olduğu belirlenmiştir.