Damar endotel hücrelerinin büyümesi, çoğalması ve canlılığını koruyabilmesi için gerekli faktörlerin belirlenmesi ve bu faktörlerin fonksiyonlarının damar oluşumu üzerinden incelenmesi

Anjiyogenez, mevcut damarlardan kılcal ve damarsal ağların tomurcuklanması yolu ile yeni damarlar oluşturması sürecidir. Oluşan damarsal ağların gelişimi, damarsal yapı etrafındaki hücrelerin sağlıklı olarak büyümesi için gerekli olan temel faktörlerin varlığı ile belirlenmektedir. Anjiogenez farklı faktörlerin sürece dahil olması ve bu faktörlerin uygun konsantrasyonlarının sağlanabilmesi gerekliliği nedeni ile oldukça karmaşık bir mekanizmadır. Anjiogenezin temel bileşenleri farklı özellikleri tetikleyen büyüme faktörleri, sitokinler ve sitokin reseptörleri olarak tanımlanmaktadır. Endotel hücreler ile birlikte kılcal damar duvarını oluşturan perisitler büyük öneme sahiptir. Anjiyogenez sürecinde kullanılan faktörleri içeren karışım doğru oranda olmalıdır ve bunu da üretebilen en iyi aday makrofaj hücreleridir. Yapılan çalışmada -80 ℃'de muhafaza edilen memeli makrofaj hücrelerinin (J774.2) sıcak su banyosu yardımı ile çözünmesi sağlanmıştır. Memeli makrofaj hücrelerine (J774-2) Roswell Park Memorial Institute Media (RPMI)+ %10 FBS %1+ %1 antibiotik [100 μg/MI pecillin and 100 μg/Ml streptomycin] içeren besi ortamı farklı oranlarda ilave edilerek 100 cm2'lik hücre kültürü plağında %90 konfluense ulaşana kadar (kültür kabının %90''ık alanını kaplayıncaya kadar) bekletilmiştir. Memeli makrofaj hücrelerinin in vitro ortamda salgıladıkları faktörleri ve miktarlarını belirleyebilmek amacı ile proteomik analiz yapılarak protein türleri ve miktarları incelenmiştir. Proteomik analiz sonucuna göre makrofaj hücrelerine ait taksonomi (J774-2) mus muskulus olarak doğrulanmıştır. Ayrıca HUVEC hücrelerine yapılan MTT analizi sırasında 24 saat, 48 saat ve 72 saat aralıklar ile besi yeri ilavesi (20 μl, 40 μl, 60 μl ,80 μl ve 100 μl ) yapılmıştır. Çalışmada deterjan reaktifi olarak (SDS) kullanılarak 570 nm' de absorbansta % hücre büyüme oranları değerlendirilmiştir. Damar oluşumunu arttıran faktörlerin etkilerinin takibi çalışma kapsamında florasan mikroskobu ile görüntüleri alınarak gerçekleştirilmiştir. HUVEC hücrelerinin damar oluşumuna etkisi liyofilize ve normal koşullar olarak iki aşamada yürütülerek raf ömrünün 6 aydan 18 aya kadar uzatılmasına katkısı araştırılmaktadır.