İki farklı gene (VEGF-A ve VEGFR-2) özgü shRNA içeren vektör tasarımı ve bunun meme kanserinde gen susturma etkinliğinin araştırılması

Amaç: Meme tümörünün büyümesi ve metastazı anjiyogeneze bağlıdır. Kanser tedavisinde tek bir anjiyogenik faktörün baskılanması, anjiyogenezin inhibisyonunda yetersiz kalabilir. Aynı anda birden fazla geni hedefleyen birkaç shRNA'yı kodlayan vektörlerin tasarımı, RNAi teknolojisi açısından önemli bir stratejidir. Birkaç shRNA'yı hedefleyen vektör tek bir mRNA içerisinde bulunan birçok bölgeyi hedefleyebildiği gibi farklı genlere hedeflenerek de daha etkin bir protein ifade baskılanması oluşturulabilir. Bu çalışmada, anjiogenezde önemli rol oynayan VEGF-A ve VEGFR-2 genlerine hedeflenen shRNA'ları içeren tek bir RNAi-temelli vektör modifikasyonu ile hücrelerde RNAi etkisinin artırılması ve meme kanserinde terapötik etkinliğinin iyileştirilmesi amaçlandı. Materyal ve Metot: Çalışmamızda VEGF-A ve VEGFR-2'ye spesifik shRNA dizileri tasarlandı ve her iki shRNA dizisi vektöre tek ve iki basamakta klonlandı ve kontrol çalışmaları yapıldı. Ayrıca, tek bir vektöre her iki dizinin birlikte ve her bir dinini vektöre ayrı ayrı klonlanmasında aynı metod kullanıldı. Tekli ve ikili olarak klonlanan plazmidlerin gen susturma etkinlikleri meme kanser hücreleri olan MCF-7 ve MDA-MB-231 hücrelerinde protein seviyesinde ELISA yöntemi ile incelendi. Bulgular: Anjiogenezde önemli rol oynayan VEGF-A ve VEGFR-2'ye spesifik dizilerin susturma vektörlerine klonlanması ile meme kanser hücrelerinde VEGF-A ve VEGFR-2 protein ekspresyonları önemli ölçüde baskılanmıştır. Çalışmamızda ikili klonlama yapılan vektörlerin tekli klonlama yapılan vektörlere göre meme kanseri hücrelerinde gen susturma etkinliği daha yüksek bulundu. Sonuç: Bu tez çalışması ile RNAi teknolojisi kullanılarak birden fazla anjiogenik faktörün ya da protein ve ilişkili reseptörünün birlikte susturulması ile meme kanserinin tedavisinde ümit verici sonuçlar elde edilebileceği önerilebilir.