Klotho proteininin NHEJ tamir yolağındaki Ku70, Ku80 ve DNA-PK genlerinin ifadesi ve proteinlerinin işleyişi üzerine etkilerinin araştırılması

Yaşlanma, zaman içerisinde canlının çevre ile olan ilişkilerinde dengelerinin çevre lehine sonuçlandığı bir süreçtir. Bu sürecin ilerleyiş hızı canlının çevre ile olan etkileşimi ve kendi kalıtsal özelliklerine bağlı olarak değişir. Bu çalışmamızda, yaşlanma ile ilgili olduğu saptanan genetik faktörlerden Klotho ( Kl ) geni ele alınmıştır. Klotho geni ilk kez farelerde tanımlanan, insanda 13. kromozomun q kolunda yer alan ve plazma membranında ve golgi aparatında bulunan tip 1 tek geçişli transmembran glikoproteinini kodlayan bir gendir. Klotho'nun hücre içi moleküler mekanizmaları nasıl etkilediğine yönelik bazı çalışmalar bulunsa da, özellikle yaşlanma sürecinde de etkisi bilinen DNA çift zincir kırıklarının (DSB) onarım mekanizmalarında rolü aydınlatılamamıştır. Bu çalışmada Klotho'nun DSB onarımında görevli, özellikle de Homolog Olmayan Uç Birleştirme (NHEJ) onarımında görevli bazı genlerin ifadesini nasıl etkilediğini araştırmayı amaçladık. Çalışmada fare hipokampal kökenli hücre serisi olan HT22 hücreleri kullanılmıştır. DNA'da çift zincir kırığı oluşturduğu bilinen Endosülfan ile öncellikle IC50 dozu belirlenmiş, daha sonra bu doz kullanılarak farklı deney protokollerinde muamele edilen HT22 hücrelerinden RNA ve protein izolasyonu yapılmıştır. Elde edilen total RNA'dan cDNA oluşturulmuş ve daha sonra Ku70, Ku80, DNA-PK genlerinin ifadelerindeki değişimler RT-PCR ile belirlenmiştir. Protein seviyesindeki değişimler Western Blotlama yöntemleri ile belirlenmiştir. Elde edilen sonuçlar çalışılan genlerin ekspresyon seviyelerinin sadece endosülfanla muamele edilen hücrelerde önemli ölçüde yükseldiğini, ama Klotho proteini de verilen hücrelerde yükselişin olmadığını göstermiştir. Bu sonuçlar, Klotho'nün Endosülfanın zararlı etkisini minimize ettiğini ve NHEJ yolağını baskıladığını düşündürmektedir. Böylece literatürde ilk defa Klotho proteininin NHEJ tamir yolağındaki rolü araştırılmıştır.