Lactobacıllus fermentum'dan safra tuzu hidrolazının moleküler klonlanması ve karakterizasyonu

Gastrointestinal mikrobiyota insan fizyolojisinde önemlidir ve konağın beslenme, fizyolojik ve immünolojik işlevlerinden sorumludur. İnsan bağırsağında, çoğunlukla bağırsak bakterileri tarafından üretilen safra tuzu hidrolazı (BSH), taurin veya glisine bağlı safra asidinin aminoasit ve dekonjuge safra asidine hidrolizini katalize eder. Dekonjuge safra asitleri, kan kolesterol seviyelerini sınırlamada ve safra taşı oluşumu, kolestaz ve kolon kanseri gibi bazı gastrointestinal hastalıkların gelişiminde önemli bir rol oynayabilir. Bununla birlikte, LAB, bugün piyasada diyet gıdaların fermentatifi için gerekli olan bir mikroorganizma grubudur. Hem BSH hem de insan sağlığı ile korelasyonu nedeniyle, BSH'lerin yapısal ve biyokimyasal özellikleri, bakteri ve konak metabolizmasının düzenlenmesindeki rollerini anlamak için önemli araştırmalar gerektirir. BSH'lerin katalitik aktiviteleri ve substrat spesifiklikleri daha fazla değişiklik gösterir. katalitik aktiviteden sorumlu olduğu düşünülen bazı aminoasitler, BSH ailesinin tüm üyelerinde tamamen korunmuştur. Sonuç olarak, bu tedavilerde ve fermantasyonda kullanılan probiyotiklerin BSH enzimlerinin etki mekanizmasını bilmek ve anlamak hayati önem taşımaktadır. Lactobacillus fermentum muhtemelen bugün piyasadaki en faydalı probiyotik türlerden biri olmasına rağmen, bu mikroorganizmanın BSH enziminin etki mekanizması ve substrat tercihleri hakkında çok az şey bilinmektedir. Bu çalışmada, L. fermentum'den 326 aminoasidi kodlayan bsh geni Escherichia coli BLR(DE3) suşuna klonlanmış eksprese edilmiş ve karakterize edilmiştir. E. coli BLR(DE3)-pET22b ekspresyon sistemi, rekombinant BSH üretmek için kullanılmıştır. L. fermentum'un rekombinant STH aktivitesi, iki farklı safra tuzu, glideoksukokolik asit ve taurodeoksikolik asit ile Doğrudan Plaka Testi kullanılarak kalitatif olarak belirlenememiştir. Buna ek olarak 37 kDa BSH proteini SDS-PAGE analizinde de görülmemiştir. Çoklu dizi hizalaması, L fermentum'un BSH enziminin bsh geninde bir mutasyona (bir kodon silinmesi) sahip olduğunu ortaya çıkardı. Bu mutasyon, L. fermentum'un BSH enziminin stabilitesini etkileyebilir. Bu bağlamda, Bu mutasyon, L. fermentum BSH enziminin stabilitesini etkileyebilir. Bu bağlamda, L. fermentumu potansiyel bir probiyotik adayı olamaz çünkü probiyotik adaylarının BSH aktivitesine sahip olmaları probiyotiklerin seçimindeki kriterlerden biridir.