Vücut sıvılarının tanımlanmasında spesifik MRNA belirteçlerinin kullanılabilirliğinin araştırılması

MRNA ekspresyonu hücre tipleri arasında farklıdır; bu özelliği ile adli örneklerde vücut sıvılarının identifikasyonu amacıyla mRNA'ların kullanılabileceği ileri sürülmektedir. Bu çalışmanın amacı kan, menstruel kan, semen ve vajinal sekresyon için seçilen bir seri mRNA belirtecinin vücut sıvılarının identifikasyonunda kullanılabilirliğini araştırmaktır. Bu amaçla kan için hemoglobin beta (HBB), glikoforin A (GYPA), semen için kallikrein 3 (KLK3), semenogelin 1 (SEM1), menstruel kan için matrix metalloproteinase 10 (MMP10) ve vajinal sekresyon için Lactobacillus gasseri (Lgas), Lactobacillus crispatus (Lcris) ve Lactobacillus jensenii (Ljen) bakteri RNA'ları seçilmiştir. Transkripsiyon elongasyon faktör SII (TEF) ve E2 ubiquitin konjugasyon enzimi UbcH5b (UCE) endojen kontrol genleri olarak kullanılmıştır. Deneysel olarak hazırlanan kan, menstruel kan, semen ve vajinal sekresyon lekelerinde RNA izolasyonu (RNA/DNA/miRNA izolasyon kiti), cDNA sentezi (superscript vilo cDNA sentez kiti), single- ve multiplex-PCR yöntemlerinin uygulanması sonrasında, PCR ürünleri otomatik kapiler elektroforezde yürütülmüştür. Çalışmada kullanılan tüm mRNA belirteçleri hedef vücut sıvılarında bulunmuştur. Bunun yanında, kan belirteçleri HBB ve GYPA doğası gereği tüm menstruel kan örneklerinde bulunurken, menstruel kan belirteci MMP10 tam kan örneklerinde tanımlanmamıştır. Vajinal sekresyonda bulunması beklenen Lgas belirteci de menstruel kanda tanımlanmıştır. Semen ve menstruel kan belirteçleri ise ilgili vücut sıvısı için spesifik bulunmuştur. Seçilen kan, menstruel kan, semen ve vajinal sekresyon belirteçleri deneysel olarak hazırlanan ve farklı ortam koşullarında bekletilen 6 aylık lekelerde gösterilebilmiştir. Ayrıca 5 yıl farklı ortam koşullarında bekletilen kan lekelerinde HBB, semen lekelerinde SEM mRNA belirteçlerinin stabilitesinin oldukça yüksek olduğu gözlenmiştir. Tüm belirteçlerin aynı anda analiz edilebilmesi amacıyla yapılan deneysel çalışmalar sonunda tüm belirteçler multiplex sisteme dahil edilmiş ve 10'lu multiplex assay üretilebilmiştir. Elde edilen bulgular ile kan, menstruel kan, semen ve vajinal sekresyon için seçilen belirteçlerin hedef vücut sıvılarının tanımlanmasında kullanılabileceği, ayrıca bu belirteçlerin multiplex amplifikasyonu ile lekelerin hedef vücut sıvılarına ait olup olamayacağı konusuna bir defada cevap verebileceği sonucuna varılmıştır. Anahtar kelimeler: mRNA, vücut sıvılarının identifikasyonu, mRNA belirteçleri, adli.